原理:
碘化丙啶(Propidium ,简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
操作步骤:
1、对于悬浮细胞,直接离心收集细胞,弃上清,在4 ℃、1200rmp下用预冷的PBS洗细胞两次;对于贴壁细胞,先用不含EDTA的0.25%的胰酶消化再离心收集细胞;
2、加入预冷的70%乙醇(PBS配制),于4℃固定过夜,或-20℃长期固定;
3、离心收集细胞,以1 mL预冷的PBS洗细胞一次,加入预冷的 PBS重悬细胞,调整细胞浓度为1.0×106,取出100 ul细胞悬液,加入RNase A酶,使RNase A终浓度为1 mg/ml,混匀后37 ℃水浴30 min;
4、加入PI综合染色液,使PI终浓度为50 ug/mL,混匀,4℃冰箱避光保存;
5、300目尼龙网过滤后,上机检测。