固体和半固体样品：

称取25g样品，置于225mL生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打lmin～2min制成1:10的样品匀液；或置于盛有225mL灭菌生理盐水的无菌均质杯中,8000r/min～10000r/min均质lmin～2min制成1:10的样品匀液。

液体样品：

应先将其充分摇匀后,以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分振摇﹐制成1:10的样品匀液。

样品稀释：

用1mL无菌吸管或微量移液器吸取l:10样品匀液lmL,沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中(注意吸管尖端不要触及稀释液),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成l:100的样品匀液。

另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头,按上述操作顺序,做10倍递增样品匀液,每递增稀释一次,即换用1次lml灭菌吸管或吸头。

培养：

根据对待检样品菌含量的估计,选择2个～3个连续的适宜稀释度﹐每个稀释度水浴80℃±l℃维持10min,吸取菌液0.2 mL接种于营养琼脂平板内,使用涂布棒尽可能小心快速地涂布接种液于琼脂表面,涂布棒不得接触平皿边缘。每个稀释度接种2个平板。涂布后,将平板静置10min使接种物完全被培养基吸收。翻转平皿置于37℃±1℃厌氧培养箱中培养48h±2h。

菌落计数：

选取特征菌落数在20CFU～200CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于20CFU的平板记录具体菌落数,大于200CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。

当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

菌落挑选和纯培养：

挑选平板上5个白色不透明、湿润、边缘光滑的菌落分别转入营养肉汤培养基37℃±1℃厌氧培养箱中培养24h±2h后进行形态学、生化鉴定。

形态学鉴定：

革兰氏染色,镜检。地衣芽孢杆菌为革兰氏阳性杆菌,呈杆状,长度1.5u.m～3.5um,单个、成对或短链状排列,有芽孢，芽孢椭圆形，中生或近中生，芽孢囊不明显膨大。

生化鉴定：

使用细菌生化鉴定试剂盒进行生化鉴定。