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Tris缓冲液在蛋白质电泳和蛋白质印迹中的用途介绍

2022-02-23

Tris缓冲液是蛋白质电泳和蛋白质印迹必不可少的。大多数SDS-PAGE凝胶,电泳缓冲液和印迹缓冲液均用Tris缓冲。所有常见的缓冲液都可以预混合,或者,如果您更喜欢自己制作Tris缓冲液,则可以从纯化的Tris粉末,甘氨酸和其他分子生物学级缓冲液试剂开始。
大多数SDS凝胶使用不连续的Tris缓冲液系统。堆积凝胶通常具有pH 6.7-6.8的特性,该凝胶具有大的孔,以便较大的肽可以轻松迁移。在此pH值下,电离的氯离子迅速迁移,从而提高了它们背后的pH值,并在电导率低的区域产生了电压梯度,这导致甘氨酸(来自运行缓冲液)离子化并迁移到氯离子的后部。样品中的大多数肽由于结合了SDS而带负电荷,它们在氯化物和甘氨酸之间迁移,形成一条窄带,因此变成“堆积”的。
一旦堆叠到达pH较高(通常为pH 8.7-8.8)的分离凝胶,甘氨酸离子化的增加会导致其加速并超过肽段。另外,较小的分辨凝胶孔径开始具有筛分作用,导致按大小分离肽。
大多数蛋白质印迹方案使用离子强度低的Tris缓冲液进行蛋白质转移。转移时间取决于印迹设备的类型和感兴趣的肽大小范围。