1.提取培养的细胞后，再加入适量的细胞裂解缓冲液（需含蛋白酶抑制剂），在冰上裂解约30分钟，在4°C条件下以最大速度离心细胞裂解液30分钟，然后取清液;
2.取少量裂解液用于蛋白质印迹分析，再向剩余的裂解液中加入1μg相应的抗体到细胞裂解液中，在4°C条件下缓慢振荡孵育过夜；
3.取10μl蛋白A琼脂糖珠，用适量的裂解缓冲液洗涤3次，每次3000转离心3分钟；
4.将预处理过的10μl蛋白A琼脂糖珠加入已与抗体孵育过夜的细胞裂解物中，并在4°C缓慢振摇下孵育2-4小时，以使抗体和蛋白A琼脂糖珠偶联。
5.免疫沉淀反应后，于4℃以3000转离心3分钟，再将琼脂糖珠离心至管底；小心吸出上清液，将琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗涤3-4次；最后，加入15μl2×SDS上样缓冲液，煮沸5分钟。
6.SDS-PAGE，蛋白质印迹或质谱分析，免疫沉淀法测定结合蛋白