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噻唑蓝比色法原理及注意事项
2021-11-18
噻唑蓝比色法检测原理：
噻唑蓝比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT实验原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
噻唑蓝的应用：
MTT通常用于细胞增殖、细胞活性测定和药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养细胞毒性的测定。
噻唑蓝比色法的优缺点：
优点：具有简便、快速、经济、不使用同位素等优点。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需要被溶解后才能检测。使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验人员的身体健康也有损害。
噻唑蓝注意事项：
1、在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包。
2、制备好的MTT需要无菌，MTT对细菌很敏感。
3、MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20℃长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4、MTT有致癌性，小心使用，有条件最好带透明的薄膜手套。通常，此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT?0.5克，溶于100?mL的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm微孔滤膜过滤除去溶液中的细菌，放置4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
