1.测定叶绿素含量是根据兰伯特-比尔定律，有色溶液的吸光度A由叶绿体色素提取物在可见光谱上的吸收来确定。可以使用分光光度计在某些特定波长下计算提取物中每种色素的吸光度，它与溶质浓度C和液体层L的厚度成正比，即A =αCL，其中：α比例常数。
2.当溶液浓度为百分数且液体层厚度大约为1cm的时候，α 被定义为物质的吸收系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸收系数，可以通过测量在不同波长下具有已知浓度的纯物质来进行测量。如果溶液中存在几种吸收剂，则在一定长度下混合溶液的总吸光度等于相应波长下的吸光度之和中各组分的总吸光度。这就是吸光度的可加性。
3.要测定叶绿体颜料混合提取物中的叶绿素a，b以及类胡萝卜素的含量时，只需要确定提取物在特定波长下吸光度系数A，并根据该波长下的叶绿素a，b以及类胡萝卜素，就可以消除在确定叶绿素a和b时，由于类胡萝卜素带来的干扰，所用单色光的波长选择了红光区域中叶绿素的最大吸收峰。