1.吸取900 ul HABA/亲和素溶液于1ml比色杯。
2.测定该溶液在500 nm 处的吸收值并记录为“A500 HABA/Avidin”。
3.吸取100 ul 生物素标记的蛋白于杯中并测定500 nm 的吸光度值，记为A500 HABA/Avidin/Biotin （数值必须恒定15s 以上）如果A500 HABA/Avidin/Biotin的值不超过（≤）0.3，重新稀释待测样品并检测。
注：计算结果时必须考虑稀释度。
计算Biotin/Protein摩尔比：
①A=生物素化的蛋白毫摩尔浓度＝蛋白浓度（mg/ml）/蛋白的分子量
②B=500nm处的吸光度变化
△A500=（0.9×A500HABA/Avidin）-A500HABA/Avidin/Biotin
③C=生物素的毫摩尔浓度=mmol Biotin/ml反应溶液=△A500/（34,000×光程）
④Biotin/Protein摩尔比=C?10?稀释倍数/